影响电泳加工度的要素

2021-12-20 10:50:15 59

影响电泳加工程度的因素

1.电渗效应

在支持物的电泳中,影响电泳的另一个重要因素是电渗效应。电渗是指液体在电场中相对于固体支持物的运动。比如在pH8.6,当血清蛋白停止纸电泳时,丙种球蛋白和其他蛋白一样,带负电,应该向正极移动,但却向负极移动,这就是电渗的作用。带负电荷的滤纸纤维之间有许多小孔,如一束毛细血管,蛋白质在停止电泳时通过这些小孔向前移动。

孔隙带负电,可以像带电粒子一样吸引正离子,所以介质沿管壁的相对区域带有更多的正电荷。在电场中,带负电的蛋白质向正电极移动,而介质向相反的阴极移动,从而阻碍了蛋白质颗粒的电泳处理。

由于γ球蛋白分子粒径大、净电荷少、移动速度慢,电渗作用大于粒子正向电泳处理的力,γ球蛋白的作用是后退。而对于其他血清蛋白,由于分子较小,净电荷较多,电渗效应小于分子向前运动的力,所以分子向前运动。因此,血清蛋白电泳后,球蛋白反而落后于斑点方向。

2.溶液的离子强度

溶液的离子强度是另一个重要的选择条件,在满足缓冲能力的前提下,离子强度要小。溶液的离子强度越高,带电粒子的电泳处理速度越慢,反之亦然。高浓度的缓冲溶液具有较低的电阻和较高的电流,并在适当的电压下产生较高的热量。假设额定热可以溶解,高浓度缓冲液的弛豫常数较低,会产生较窄的电泳带。当离子强度很高时,应使用低电压,以避免过度发热,导致电泳时间长,难以分别增加变性和区带。3.溶液的酸碱度。

溶液的酸碱度选择带电粒子的解离水平,也选择物质的净电荷。对于蛋白质、氨基酸等电解质,溶液pH值离电点越远,颗粒净电荷越多;电泳速度越快;否则,速度越慢。比如血清中几种主要蛋白质的等电点不同,白蛋白的等电点为4.0。α球蛋白的等电点为5.06,β球蛋白为5.1,γ球蛋白为7.1。在pH8.6电泳缓冲液中进行电泳时,这些蛋白质都带负电荷,其电泳处理速度为白蛋白<α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白。因此,当要分离蛋白质的混合物时,应该选择能够扩大各种蛋白质电荷差异的酸碱度,以促进各种蛋白质分子的解离。同时,为了在电泳过程中保持溶液的酸碱度稳定,还应使用缓冲溶液。